大量的流行病学调查研究表明，长期大量地吸烟与人体许多疾病的发生密切相关。而烟草燃烧时除产生大量化合物之外，还产生高浓度的自由基，这些自由基与机体的许多功能障碍和疾病的发生如吞噬、解*、炎症、衰老、肿瘤、辐射损伤有密切的关系。

现已有大量的证据说明这些自由基引起与抽烟有关的疾病。维生素C(VitC)是机体良好的抗氧化剂，能降低ROS对机体的损伤作用。

本研究用超氧化物歧化酶(SOD)测试盒检测小鼠血液中的SOD水平。该测试盒采用*嘌呤氧化酶法测定，通过*嘌呤及*嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基氧化 形成亚 盐，经显色后可在分光光度计中测其吸光度。机体在氧化应激作用后能产生对机体有害的脂质 化物(LPO)，如丙二醛(MDA)。丙二醛(MDA)测试盒通过降解产物中的MDA，进而与 巴比妥酸发生缩合，形成红色产物，在nm处有 吸收峰，经分光光度计比色测定其水平。另外，烟草烟雾能直接或间接地对细胞DNA产生一定的损伤作用。

本研究通过单细胞凝胶电泳实验来检测吸烟小鼠外周血淋巴细胞DNA的受损情况。通过以上实验和调查，从各方面来探讨烟草烟雾对实验小鼠的损害作用以及VitC参与下机体的抗氧化作用。

1材料与方法

1.1主要材料、试剂和仪器烟草；VitC注射液；超氧化物歧化酶(SOD)测试盒；丙二醛(MDA)测定试剂盒；淋巴细胞分离液；低溶点琼脂糖(LMA)；核酸染料；电泳仪；电泳槽；分光光度计；荧光显微镜；离心机；实验用合格小白鼠。

1.2血样采集将实验小鼠随机分成3组，每组12只，分别为正常对照组、吸烟VitC组和吸烟无VitC组。吸烟无VitC组给予熏烟处理(见图1)28天，每天4~5h，平均每20min燃烧烟草0.5g；吸烟VitC组给予相同的熏烟处理，并同时补给VitC，腹腔注射，0.05mL/天·只；正常对照组不作任何处理。第29天，摘取小鼠眼球取血，每只约1.5mL，置于预先肝素抗凝处理的EP管中。

1.3SOD及MDA测定收集好的血液须尽快检测；离心取上清血浆成份，各取5μL做SOD活性测定，于nm波长分光光度计处，1cm比色杯，蒸馏水调零，比色；各取μL做MDA测定，nm处，1cm光径，蒸馏水调零，比色。

1.4单细胞凝胶电泳

1.4.1淋巴细胞分离取抗凝血0.5mL，1mLPBS稀释，混匀；另取离心管加入0.5mL淋巴细胞分离液，再在其上轻轻铺上1mL血液稀释液，室温下rpm离心10min，取中间有核细胞层，移入2mLEP管中，PBS洗涤稀释，调整细胞数为个/μL，4℃存放。

1.4.2制片制备1%和1.25%低溶点琼脂糖，于50℃水浴中保温；取1%低溶点琼脂糖μL在盖玻片上铺 层琼脂，迅速摊平；待凝固后，取1.25%低溶点琼脂糖μL与细胞悬液80μL迅速混匀铺第二层，待凝固后再取1%低溶点琼脂糖铺第三层，凝固后放入4℃细胞裂解液中裂解1h。

1.4.3电泳设置电流mA，电压约为20V(不能超过30V)，电泳25min。

1.4.4观察取出玻片与琼脂，PBS洗涤2次，滴入10μLGoldview核酸染料染色5分钟，于荧光显微镜下观察。数据分析。

1.5用SPSS12.0forwindows分析数据。

2结果

2.1烟草烟雾及VitC对机体SOD和MDA水平的影响，见表1、2

从表中可以看出，MDA含量吸烟无VitC组偏高，而正常对照组 ，注射VitC的比不注射VitC的低。SOD含量为正常组 ，吸烟VitC组和吸烟无VitC组稍高于正常组，但两组间差别不大。

2.2烟草烟雾对小鼠外周血淋巴细胞的损伤作用结果表明，熏烟28天后，吸烟无VitC组大部份血液有较明显的拖尾现象。吸烟VitC组的拖尾现象不明显，而正常对照组则不出现拖尾(见图2)。

烟草烟雾作用于小鼠后，机体经过一系列复杂的应激反应，产生对机体有害的ROS，虽然机体能经过本身的抗氧化系统清除ROS和MDA，但当长期大量地吸烟后，能慢性损耗该系统进而影响细胞的正常新陈代谢。

实验中发现，吸烟无VitC组和吸烟有VitC组的小鼠较正常组的小鼠瘦小，肌肉力量及反应灵敏度也不及正常组，而吸烟无VitC组与吸烟有VitC组在体重、心率和呼吸等方面差别不大。

从实验数据可得，经熏烟处理后，吸烟无VitC组MDA含量高于正常对照组，注射VitC组的MDA含量则要偏低。说明注射VitC对于清除体内ROS，保护机体细胞有一定的效果。此与国内大量研究结果相一致。

但SOD活力水平则与现有文献不同，也与当初的预想有点出入。吸烟VitC组和吸烟无VitC组都稍微高于正常组，而两组间差别不明显。

分析原因可能有二：一为在实验中出现了操作方法的问题，同时可能也受取血时间，熏烟程度等影响，造成数据有所偏差；而排除以上原因后，可能是该熏烟的浓度能引起MDA含量的升高，却不能降低SOD含量，提示此浓度烟雾对机体产生轻微的应激反应，机体从而产生更多的SOD来清除体内的ROS和MDA，而MDA被大量清除，所以体内含量降低；当烟雾浓度再升高后，可能会造成SOD含量的降低。

另外可能此VitC的注射量对SOD有一定的保护作用，提示可能VitC通过诱导抗氧化酶SOD的活性增加细胞的清除自由基的能力实现其抗氧化作用。因为小鼠自身肝脏的解*能力非常强，所以短期内DNA的损伤程度较小，实验难以发现。

而吸烟28天后可见外周血淋巴细胞有彗星拖尾的现象，且低倍视野内可见大部份细胞有不同程度的拖尾，无VitC组较VitC组的明显，但总体两者相差不大；可能是由于VitC的用量不足(0.05mL/天·只)所致。但同时说明VitC只是一种辅助缓解的还原剂，而不能单方面依赖VitC就能起到解*抗氧化的作用。所以，须合理足量地服用VitC以达到辅助治疗的目的。

我公司生产的JY-SC系列彗星电泳槽。可用于对细胞中的DNA的损伤的检测，以对其药物*理性和致癌性的研究。

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